2017年华东干细胞库技术培训

Day 1   1. 培训班开班仪式，相关情况介绍;

2. 专家讲座：间充质干细胞研究进展报告;

3. 脂肪间充质干细胞成脂分化（4 天后可观察到结果）。

Day 2   1. 当天实验内容介绍与背景知识；

2. 大鼠 BMSCs 和 ADSCs 的分离；

3. 制备神经悬球，成软骨悬球。

Day 3  1. 当天实验内容介绍与背景知识；

2. 给昨天制备的细胞换液；

3. 三系分化的操作：成脂、成骨分化鉴定，包括 BMSCs 和 ADSCs，包括试剂配置，染色步骤，显色，比较成脂及成骨能力的差异；

4. 软骨细胞分化，包括细胞球制备，软骨细胞固定，包埋，切片、软骨细胞染色观察。

Day 4  1. 当天实验内容介绍与背景知识；

2. 神经分化细胞 RNA 提取，成骨分化基因的鉴定；

3. Q-PCR鉴定特征分子的表达；

4. 细胞固定并结合荧光标记的抗体（6 皿细胞：2 皿 BMSC，4 皿 ADSC）；

5. 流式技术确定骨髓及脂肪间充质干细胞表面特征分子的表达；

6. 实验问题总结与交流；

7. 颁发结业证书。

2.干细胞库及临床干细胞研究介绍；

3.人 ES 细胞实验流程介绍；

4.小鼠胚胎成纤维细胞原代取材。

5.复苏滋养层细胞

2.人 ES 细胞的机械传代。

2.人 ES 细胞的胶原酶传代

3.人 ES 细胞体外诱导分化；

4.复苏细胞换液观察。

2.人 ES 细胞的冻存；

3.人 ES 细胞的无滋养层培养。

4. 人 ES 体外分化细胞观察；

5. 人 ES 细胞的鉴定：标志基因的免疫荧光染色及碱性磷酸酶染色。

6. 颁发结业证书

Day 1   1. iPS细胞研究进展介绍；

2. 干细胞库及临床干细胞研究介绍；

3. iPS细胞制备流程介绍；

4. 病毒包装相关质粒的转染；

5. 小鼠 iPS 细胞的传代与类胚体的培养。

Day 2   1. MEF与 HEF 的传代与铺板；

2. 小鼠胚胎成纤维原代细胞的制备

Day 3   1. 小鼠 iPS 细胞克隆形态观察；

2. 标志性基因的免疫荧光染色实验与 AKP 染色实验；

3. 病毒感染。

Day 4   1. 病毒感染细胞培养液的更换；

2. AKP染色、免疫荧光染色结果观察。

3. 类胚体形态观察；病毒滴度测定；

4. 畸胎瘤形成实验：iPS 细胞注射；

5. 观察重编程起始阶段的细胞形态变化；

6. 颁发结业证书。

Day 1   1. 培训班开班仪式，相关情况介绍；

2. 专家讲座：基因编辑研究进展报告；

3. Crispr/Cas9 基因编辑技术策略；

4. 碱基退火

2.Crispr/Cas9 gRNA 载体构建（载体酶切，连接，转化）；

2.载体构建 - 挑克隆，小摇 PCR 鉴定；

3.基因编辑细胞的转染；

4.基因编辑细胞的鉴定；

Day 4   1. 当天实验内容介绍与背景知识；

2. 基因编辑细胞的筛选；

3. 实验问题总结与交流；

4. 颁发结业证书。